本发明公开了一种基于糖蛋白密码子优化的狂犬病重组疫苗,它是以LBNSE‑GL‑G为母本毒株,将LBNSE‑GL‑G株的G基因依据鼠源密码子偏爱性进行序列优化得到OG基因,将LBNSE‑GL‑G株基因组中的两个G基因替换为OG基因,通过反向遗传操作拯救重组病毒,得到LBNSE‑OGL‑OG狂犬病重组疫苗株,所述OG基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。该重组病毒LBNSE‑OGL‑OG具有良好的增殖特性和安全性,并且提高了狂犬病毒糖蛋白的表达量,灭活后肌肉免疫可以增强机体的免疫反应,诱导高水平的中和抗体,提高机体保护率。